正置式生物荧光成像系统——正置共聚焦荧光成像原理与应用​

　　正置式生物荧光成像系统物镜位于样本上方、载物台在下，适合透明/半透明切片、涂片、玻片样本及部分小型模式生物的整体荧光成像，也可兼容大尺寸样品或特殊载具。
 

　　一、正置共聚焦成像原理

　　与倒置系统相同基于点扫描共聚焦原理：激光经扫描镜聚焦穿过物镜上方照射样品，荧光自下向上（或经样品透射/反射路径）被同一物镜收集，经二向色镜与发射滤片到达PMT/GaAsPPMT，针孔滤除非焦平面信号。正置光路更便于使用标准载玻片、组织切片、制备物及染色后封片样本，且易于配合显微操作、显微切割或上置照明（明场/相差/微分干涉DIC）。

　　系统支持405/488/561nm基础激光并可选配多波长，发射检测范围400–750nm（可定制NIR），配备自动滤片转盘切换，适配DAPI/FITC/TRITC/Cy5等常用染料组合。

　　二、主要功能与操作特点

　　正置结构适配载玻片、组织切片、染色体涂片等常规病理/组化样本

　　Live模式实时对焦与灵敏度调节，快速获得清晰荧光图

　　Z-STACK三维重构（Top/Bottom、Center/Range、Upper/Lower三种设定方式）

　　TimeLapse延时序列，适合固定组织再染色后动态漂白或光激活实验

　　TileStitching大区域拼接+EDF深度拼接，兼顾广域与深度信息

　　自动孔板扫描（对正置亦可适配特殊底部薄孔板或玻底insert）

　　兼容Nikon/Olympus/Zeiss/Leica正置显微镜机身，模块化激光与探测单元可独立升级

　　三、典型应用

　　免疫荧光（IF）组织切片多重标记共聚焦分析

　　肿瘤组织微环境荧光标记物空间分布研究

　　植物叶片、根尖切片GFP报告基因表达定位

　　微生物涂片、菌丝侵染切片荧光观察

　　染色体FISH共聚焦成像

　　与显微切割或上置电生理联用前的荧光定位确认

　　正置式生物荧光成像系统兼顾经典正置光路操作习惯与激光共聚焦光学切片能力，是组织学、病理学及固定样本荧光精细分析的重要工具。